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期刊要求WB整张凝胶下载_期刊网国家承认吗(2024年12月最新版)

内容来源：安定传媒所属栏目：新闻更新日期：2024-11-29

期刊要求WB整张凝胶

WB条带显影全攻略：轻松搞定高亮问题经过一番努力，终于掌握了WB条带显影的所有技巧！以下是详细的使用指南和解决高亮问题的方法。使用目的：WB条带显影（PVDF膜）仪器：美国BIO-RAD伯乐Gel Doc XR+凝胶成像系统软件：Image Lab 解决以下问题：条带显影拍marker 合并条带和marker 解决过曝导致的红色高亮拍条带步骤打开Image Lab软件，选择“起始页-新建-应用程序-印迹”，然后选择第二个分折表。选择“实验协议”，进入“凝胶成像”设置。设置信号累计模式，调整曝光时间和强度。点击“放置凝胶”，调整条带位置，直接保存为软件格式的ptl文件或截图保存为jpg格式。拍marker步骤在Image Lab软件中，选择“起始页-新建-应用程序-印迹”，然后选择第四个分折表。不需要设置信号累计模式，直接点击“放置凝胶”，保存图片。合并marker和条带打开Image Lab软件，确保两张图片同时在软件里。选择左侧第一个“图像工具”，点击最底下的“合并”按钮。调整图片位置和大小，保存合并后的图片。解决过曝高亮问题在Image Lab软件中，打开需要处理的图片。选择“图像工具”中的“黑白太阳”按钮。调整伽玛值和最小值，取消高亮显示饱和像素即可。通过以上步骤，可以轻松解决WB条带显影中的各种问题，获得清晰的实验结果。

实验室有毒试剂清单｜珍爱生命，远离实验昨天在实验室搞多聚甲醛的时候，没在通风橱里操作，结果今早起来头巨痛！真是教训啊，大家做实验一定要戴好口罩，做好防护！立马整理了一下实验室里的有毒试剂，绝不做实验室的牺牲品！ DMSO（二甲基亚砜）𐟧ꊨ🙤𘪤𘜨忧”褺Ž冻存液的配置，还有作为常见粉剂的溶剂。但它有血管毒性和肝肾毒性，小心为上！ EB（溴化乙锭）𐟒€ EB用于琼脂糖凝胶电泳的核酸染料，剧毒！我们学校仪器平台都不让用EB显影，致癌性很强，大家一定要小心。 PCR实验𐟧슥šPCR实验的时候，苯、二甲苯、酚、trizol、氯仿这些有机溶剂都是致癌的。还有DEPC（焦炭酸二乙酯），用于溶解RNA，但它是潜在的蛋白质变质剂。做PCR一定要戴好口罩！ WB实验𐟓Š WB实验中，PMSF用于蛋白提取，高强度毒性；SDS（十二烷基硫酸钠）用于SDS-PAGE电泳凝胶配置，有刺激作用，可能引起呼吸系统过敏性反应；丙烯酰胺（未聚合）是蛋白电泳凝胶原料，有潜在神经毒性；TEMED（四甲基乙二胺）用于SDS-PAGE凝胶配置，催化凝胶凝固，但易挥发，强神经毒性。 Triton x-100𐟧𔊨🙤𘪤𘜨忦œ‰刺激性，可以因吸入或皮肤吸收受害，大家要小心。多聚甲醛𐟕𕯸‍♂️ 多聚甲醛用于组织固定灌流，易挥发且剧毒。昨天我就是因为这个倒霉东西头才这么痛的。 DTT (二硫苏糖醇)𐟧ꊥ𐏥ˆ†子有机还原剂，散发出难闻的气味。可以因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。吉姆萨 Giemsa𐟦 吉姆萨染料有极强的毒性，可致命或引起眼睛失明。可以通过吸入和皮肤吸收，其可能的危险是不可逆的效应。过硫酸铵 APS𐟒动🇧᫩…𘩓𕥯𙩻膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性。吸入可致命。甲醇𐟍𖊧”𒩆‡有毒，致命剂量大约是70毫升。甲醇的毒性对人体的神经系统和血液系统影响最大。它经消化道、呼吸道或皮肤摄入都会产生毒性反应，甲醇蒸汽能损害人的呼吸道粘膜和视力。佩戴好防毒面具和护目镜，避免接触其蒸汽，注意在通风橱内操作。乙醚𐟔劤𙙩†š高度挥发，遇明火、高热极易燃烧爆炸，并有特殊气味。化学性质不稳定，日光下去空气接触，易形成爆炸性过氧化物过氧化乙醚。应小心使用。广泛用作麻醉剂。希望大家在做实验的时候一定要注意安全，珍爱生命！

全膜时代，WB实验成本飙升！ 𐟔 什么是全膜？很多人误以为全膜就是所有蛋白都在一张膜上跑，但实际上，全膜指的是用显影仪拍照得到的图片，未经任何裁剪、拼接等处理。一些期刊要求全膜必须包含分子大小标记物，甚至在特定情况下需要阳性和阴性对照。例如，期刊J CELL BIOCHEM就明确要求这一点。（图2，图片源于Journal of Molecular Medicine-JMM） 𐟔 为什么要全膜？ WB实验在生物学领域容易造假，有些人为了得到预期的实验结果，会直接转染过表达质粒或shRNA质粒来控制蛋白表达量。更离谱的是，有些实验室甚至直接更改蛋白名字，将A蛋白的数据结果改为B蛋白。这些“骚操作”迫使各大杂志要求提供全膜材料，以减少数据的不真实性。 𐟔 全膜的成本增加更换为全膜后，实验室的成本大幅增加。首先，抗体消耗是WB实验的主要成本之一。虽然抗体成本在逐步降低，但更换为全膜后，抗体使用量可能是之前的2-3倍，导致成本呈指数型增长。其次，在裁膜时代，一张膜可以最大化利用，可能检测多个指标。换为全膜后，一张膜只能检测一个指标。这不仅增加了时间成本，还增加了试剂成本。例如，制备凝胶、电泳、转膜等过程中所使用的试剂成本也在大幅增加。总体下来，成本可能是之前的3-5倍。最后，还有人力成本。正常一个WB实验从制备样本到完成检测，再到最后的显影结束可能花费2-3天。现在不论是使用抗体剥离液还是一张胶只进行一个抗体指标的检测，都会大幅度提高人力成本。 𐟔 总结综上所述，WB实验更换为全膜后，一次实验的成本可能是之前的5倍左右。同时，时间花费也会是之前的2-3倍，甚至更多。这不仅会增加实验室的成本，还会让研究生们花费更多时间进行实验。在研究生涯中，这无疑是一笔额外的负担。

WB制胶必知的9个关键步骤嘿，大家好！今天我们来聊聊WB（Western Blot）制胶的那些事儿。制胶这个过程看似简单，但细节决定成败。下面我给大家分享一些我自己总结的小技巧，希望能帮到你们。清洗玻璃板和边条 𐟧𜊩斥…ˆ，配胶用的玻璃板和边条一定要洗干净，最好用洗洁精这种去污力强的洗涤剂。洗完后，确认没有疙瘩凸起，不然会影响电泳效果。防止漏胶的小技巧 𐟚犥ˆ𖨃𖦗𖥦‚果发现漏胶，那可能是玻璃板底部和海绵垫没贴紧。有两个小建议：在玻璃板底部裹一张保鲜膜再放到海绵垫上压紧。用较高浓度的琼脂糖凝胶（就是跑DNA的那个）封底，凝固后再灌胶，这个方法我亲测有效，绝对不会漏胶。避免气泡的小窍门 𐟌쯸 凝胶要充分混匀，因为配方中有容易起泡的SDS，所以吸打时不要速度过快，尽量避免产生气泡。混匀后，可以让液态胶静置15秒左右，让气泡上浮。加胶时可以用两档吸一档打的方式，防止再打入空气。如果胶中有气泡或者其他杂质，你的条带可能会弯曲。凝胶要充分凝固 ❄️ 凝胶需要充分凝固，如果没凝固好就进行电泳，跑出来的条带会一团糟。如果放置超过1小时还没凝固，那可能是凝胶成分加错了，尤其是APS是否变质。TEMED催化APS释放化学基团，再由APS释放的基团催化凝胶聚合，所以如果APS不新鲜，加再多的TEMED也没用。其实没有APS和TEMED也能凝固，只是需要多花点时间。液封的重要性 𐟌Š 液封是制胶过程中不可或缺的一步，平整的分离胶有助于得到平整的条带。常见的液封液有异丙醇、乙醇，也可以用超纯水替代。液封时要紧贴玻璃板，由左至右缓慢滴加。冲击力过大不仅不能压平分离胶，反而会直接溶入分离胶使分离胶凹凸不平。保存制好的凝胶 𐟧Š 如果制好的凝胶不马上进行电泳，可以从制胶架上拆下来，保留梳子，然后用保鲜膜包裹好放入4℃冰箱，保存时间不应超过1周，最好是现配现用。提前准备好分离胶和浓缩胶 𐟏튥悦žœ你经常需要跑WB，可以提前配好分离胶和浓缩胶（除APS及TEMED外），过滤后作为储存液避光存放于4℃，可存放1个月。使用时，先放室温平衡，再加入相应的10%APS及TEMED即可，这样可以减少大量重复时间。市面上也有聚丙烯酰胺凝胶预混液出售。调整点样梳的厚度 𐟓 点样梳需与玻璃板匹配，如制作1.5mm厚度的凝胶应使用1.5mm的点样梳，否则拔掉梳子后，可能会发现每个胶孔都被胶堵了。增加浓缩胶长度 𐟓ˆ 如果发现WB的条带或者电泳时的溴酚蓝很粗，可以适当增加浓缩胶的长度。好了，今天的分享就到这里。希望这些小技巧能帮到你们，祝大家实验顺利！如果有任何问题，欢迎留言讨论哦！

史上最全WB实验操作及原理讲解③ Western Blot 实验通常使用SDS-PAGE进行电泳，根据目的蛋白的分子量选择合适的凝胶浓度。以10%的SDS-PAGE自制胶为例，以下是详细的操作步骤和注意事项：制备凝胶 𐟧ꊨㅩ…好灌胶的模具，按照配方配置分离胶（适量的丙烯酰胺溶液、10% SDS、分离胶缓冲液），加入适量的过硫酸铵和TEMED，轻轻搅拌（不要产生气泡）后缓慢加入到模具中。再在页面上小心注入一层水，以阻止氧气进入凝胶溶液中，静置40分钟。待凝胶聚合后，分离胶和水层出现一个清晰的界面，吸尽分离胶上的水。同样按比例配置浓缩胶（浓缩胶浓度较分离胶低），缓慢加入分离胶的上面，直至灌满。将梳子插入凝胶内，注意不得在梳子齿尖留有气泡，静置60分钟以上待凝胶聚合后拔出梳子。注意事项及原理 𐟓‹ 分离胶浓度：不同的分离胶浓度对不同的目的蛋白分子量的分辨率不一样，所以Western Blot中分离胶浓度的选择取决于目的蛋白分子量。过硫酸铵和TEMED的量：聚丙烯酰胺(PAGE)是由丙烯酰胺聚合形成的高分子，这个聚合反应是自由基聚合，需要有引发剂产生自由基将反应引发。过硫酸铵（AP）就是引发剂，而TEMED（四甲基乙二胺）可以催化过硫酸铵产生自由基，催化聚丙烯酰胺单体聚合成网状结构。但是两者的量一定适宜，否则会有烧胶或带变形的可能。加入一层水：在注入分离胶后上面需要加入一层水，这是因为空气中的氧分子会氧化AP使其活性减弱。加入这层水后可以让反应快速进行，同时也保证了分离胶上层面的平整。加样 𐟒犥𐏥🃦‹”出梳子，将制好的凝胶及玻璃板放入电泳槽内并组装好。将电泳缓冲液加入内外槽，使凝胶的上下两端均能浸泡在电泳缓冲液中。将待测蛋白样品与上样缓冲液按比例混合，沸水中加热3-5分钟使蛋白充分变性。将样品加入到凝胶孔中，同时必须在同一片胶的孔中加入蛋白marker作为参照。加样时间要尽量短，以免样品扩散。电泳 𐟔‹ 当样品上样并接通两极间电流后（电泳槽的上方为负极，下方为正极），在凝胶中形成移动界面并带动凝胶中所含SDS负电荷的多肽复合物向正极推进。电泳时通常上层浓缩胶时采用低电压（80-100V）恒压电泳，而在溴酚蓝进入下层分离胶时采用高电压（120V）恒压电泳。溴酚蓝染料前沿下至凝胶末端时停止电泳。电泳完毕的胶完整地放在盛有电泳液的玻璃皿中，将目的蛋白所在区域切下来。持续更新，敬请关注~

WB实验优化指南：提高效率与安全性 ### 凝胶制备的优化 𐟧ꊊ传统的WB实验中，凝胶制备是一个繁琐的过程。其实，你可以提前将去离子水、30% Acr-Bis、Tris、10% SDS、TEMED 等试剂混合在一起，保存在4Ⰳ避光的地方，有效期可达一个月或更长时间。这样，整个制胶过程就简化为了只需添加一种试剂。另外，为了方便上样，可以在上层胶中加入染料指示剂，形成预染胶。当然，你也可以选择使用商品化的制胶试剂盒，虽然价格稍高，但操作更简便。电泳缓冲液制备的优化 𐟌Š 电泳缓冲液的配方也有优化的空间。传统的配方在高电压下会出现蛋白质信号丢失的问题，而且不能明显缩短电泳时间。经过优化后的配方（Tris 38.1 mM、甘氨酸266.7 mM、HEPES 21.0 mM、SDS 3.5 mM、pH 8.3），可以在室温、200 V、35 min内完成电泳，并且高效分离小分子蛋白。300 V时仍能正常电泳，但电压过高容易产热，需要冰浴降温。建议配置5X的电泳液备用，因为1㗧”𕦳𓧼“冲液室温保存后容易发生絮凝。转膜液制备的优化 𐟌€ 在WB实验中，甲醇的毒性是一个大问题。其实，你可以用无水乙醇来替代甲醇配制转膜液。这样一来，所有需要用甲醇的地方都可以用乙醇替代（包括膜的活化和转膜液的配制）。为了自己的健康，做实验时，能用低毒或无毒的试剂替代时，一定要替代，不要因小失大！转印膜选择的优化 𐟓„ 转印膜的选择也会影响实验结果。0.45 ⵭ NC 膜比 0.45 ⵭ PVDF 膜更好地拦截蛋白质标记染料。对于小分子量蛋白，0.22 ⵭ PVDF膜的截留能力明显强于0.45 ⵭ PVDF膜和0.45 ⵭ NC膜。一直以来，0.22 ⵭ PVDF膜都是首选，因为它不会让小分子蛋白转过。凝胶切割的优化 ✂️ WB条带是论文造假的重灾区。每年都有无数论文因蛋白质条带而在PubPeer上受到质疑。渐渐地，一些期刊开始提倡使用未切割的凝胶。未切割的凝胶虽然增加了工作量，但可以确认相应分子量的目标蛋白并验证一抗的特异性。另外，条带太宽也不是什么好事，这样会增加非特异性条带的产生。通过这些优化方法，你可以提高WB实验的效率、安全性和准确性。希望这些建议对你的实验有所帮助！

𐟔젨›‹白质分析的利器：WB实验全攻略 𐟓– 𐟧ꠥ‡胶配制：选择适合蛋白分子量的分离胶浓度，参考试剂盒说明或相关文献。 APS需在4Ⰳ冰箱保存，配胶时需混匀。加入TEMED前，先混匀其他组分。将分离胶缓缓打入玻璃板，加入ddWater或无水乙醇封胶。 𐟒砤𘊦 𗯼š Marker孔加5-10，蛋白总上样量30-50。 ⚡ 电泳：接电源，先用80V恒压至溴酚蓝到浓缩胶与分离胶交界，改120V至凝胶底部。 𐟔„ 转膜（湿转）：取出凝胶，切下目的条带，用蒸馏水冲洗。裁剪与SDS-PAGE凝胶大小的PVDF膜，浸泡于电转缓冲液。按顺序放置黑色板-纤维垫-滤纸-凝胶-PVDF膜-滤纸-纤维垫-白色板，夹紧后放入湿转槽。加满电转液，置于冰水中，加入冰袋降温。 𐟚력𐁩—�Œ抗体孵育：漂洗PVDF膜，用含5%脱脂奶粉的TBST（磷酸化蛋白用5%BSA）封闭2小时。用含5%脱脂奶粉的TBST（磷酸化蛋白用5%BSA）稀释一抗，4℃孵育过夜。 TBST充分洗涤PVDF膜3次，15min/次。用稀释一抗体系相同的稀释液稀释HRP标记二抗，室温孵育1小时。 TBST充分洗涤PVDF膜4次，15min/次。 𐟒ᠦ˜𞨉𒦛光：混合ECL发光液A液与B液1:1。取出PVDF膜，用滤纸吸干水分，放置于成像仪上，均匀滴加ECL工作液，开始曝光。

nc膜有正反吗在进行WB实验时，选择合适的膜材料至关重要。PVDF膜和NC膜是两种常见的选择，它们各有优缺点。以下是它们的详细比较： PVDF膜（聚偏氟乙烯膜）蛋白质截留能力强：与NC膜相比，PVDF膜具有更强的蛋白质结合能力，结合强度是NC膜的6倍。机械强度和化学耐受性：PVDF膜具有更好的机械强度和化学耐受性，适用于各种染色应用和多重免疫检测。单个凝胶的泳道复本可用于多种目的，如考马斯亮蓝染色后切出条带并进行N末端测序、蛋白消化/肽分离/内部测序和免疫检测。多种孔径选择：PVDF膜有多种孔径可供选择，随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。大于20kD的蛋白选用0.45的膜，小于20kD的蛋白选用0.2的膜。 NC膜（硝酸纤维素膜）操作简便：NC膜使用方便，操作简单，兼容多种检测方法。与PVDF膜相比，不需要甲醇浸泡过程，适合在亲水环境下进行蛋白质转移。在转移前，仅需要在水中简单润湿，然后置于转移缓冲液中，不需要其他的预湿步骤。低背景：NC膜本身产生的背景非常低，膜特有的表面性质保证了优异的信噪比，在膜洗脱时不需要严格的洗脱条件。小分子蛋白的高截留率：NC膜有多种孔径以供选择，按照不同的使用要求进行选择相应的孔径的膜： 0.22的NC膜通过小孔径来截留分子量小于20kD的蛋白质分子。 0.45的膜是较大分子蛋白和核酸的理想选择。 0.1的膜常用于分子量小于7kD的蛋白质。保质期更长：NC膜的保质期更长，可保存五年。选择合适的膜材料对于WB实验的成功至关重要。希望这些信息能帮助您做出明智的选择。

WB实验全攻略：从电泳到曝光 ### SDS-PAGE 电泳 𐟌Š 上样准备：首先，用斜插板固定玻璃板，确保底部对齐，避免漏胶。然后，将分离胶灌到适当的高度，可以用梳子测试一下，梳子齿距离分离胶上液面大约7mm为宜。接着，用异丙醇或蒸馏水封胶，静置30分钟。之后，缓慢均匀地加入浓缩胶，直至加满，再加上梳子，等待20分钟后分离胶凝固。电泳槽中加入电泳缓冲液，使两块玻璃内侧电泳液高于上样孔，外侧电泳槽内电泳液浸没凝胶底部，玻璃板内侧液面高于外侧。开始上样，每孔总上样量在20 以内，上样时间要短，避免样品扩散。转膜 𐟔„ 转膜摆放顺序为：阴极碳板+海绵+三层滤纸+胶+膜+三层滤纸+海绵+阳极碳板。将电泳完毕的凝胶取出，放入转膜缓冲液中。采用“三明治”模式，打开电转印夹，每侧垫上一块专用的转膜液浸透过的海绵垫，再各放一块滤纸，凝胶平稳地放在阴极滤纸上。接着，将已经用甲醇激活过的PVDF膜放在凝胶的上方，去除气泡，夹好夹子，将转印夹放入转印槽中。封闭与抗体孵育 𐟧ꊥ𐆨𝬥𐥮Œ的膜放入装有PBST的孵育槽中，快速漂洗一次，然后加入脱脂牛奶，放置脱色摇床上，室温下封闭60分钟。按照抗体说明书，进行一抗稀释，配置好后，倒掉孵育槽中的封闭液，加入配置好的一抗，4℃孵育摇床过夜（摇床慢摇）。回收一抗，用PBST快速洗膜三次，然后加入PBST，放置脱色摇床上快速洗脱，每次10分钟，洗三次。将二抗用PBST按照1:5000的比例进行稀释，然后加入孵育槽中，放置摇床上慢摇，室温下孵育60分钟。 PBST快速洗膜三次，然后再加入PBST，放置脱色摇床上快速洗脱，每次10分钟，洗三次。曝光 𐟓𘊦 𙦍᥸榷𑦵…调整曝光时间。通过以上步骤，你就能完成一次完整的WB实验啦！希望这篇攻略能帮到你。

WB转膜必备：甲醇的四大作用揭秘大家好！这里是兔呦呦，来自北大医学部的研究生，致力于为大家解析每一个基础实验的奥秘。今天我们来聊聊WB转膜中甲醇（乙醇）的四大重要作用。 1️⃣ 去除SDS，促进蛋白质与膜的结合在SDS-PAGE中，SDS会包裹蛋白质，使其带负电并展开。为了将蛋白质顺利转移到膜上，需要去除蛋白质上的SDS。甲醇能够去除部分SDS，帮助蛋白质恢复与膜的结合能力，确保它们能牢固地附着在膜上。如果不用甲醇，SDS残留过多会干扰蛋白质与膜的结合，导致转移效率下降，甚至无法成功转移蛋白质。 2️⃣ 活化PVDF膜，增强蛋白质结合能力 PVDF膜（聚偏氟乙烯膜）是常用的转膜材料，但它本身是疏水性的。甲醇能使PVDF膜变为亲水性，从而提高膜对蛋白质的吸附能力。在使用PVDF膜前，通常需要用甲醇预处理，即短暂浸泡在甲醇中。这一步使得膜可以更好地捕捉和绑定蛋白质，增强转移效果。 3️⃣ 影响凝胶结构，帮助蛋白质顺利转移甲醇会影响凝胶的孔隙结构，特别是让凝胶轻微收缩。这个收缩有助于大分子蛋白质更容易从凝胶中释放并转移到膜上，确保更高效的转移过程，尤其是对高分子量蛋白质的转移有积极作用。 4️⃣ 减少电转移过程中气泡的生成在电场作用下，电转移过程中容易产生气泡。这些气泡会阻碍蛋白质从凝胶到膜的转移，造成膜上蛋白质分布不均匀或出现空白区域。甲醇能减少这种气泡生成，确保转移均匀进行。希望这些解释能帮助大家更好地理解WB转膜中甲醇的作用，实验顺利！𐟒ꀀ

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