绿色纤维论文权威发布_绿色纤维论文参考(2024年11月精准访谈)
细胞标记必备:活细胞示踪剂使用指南 最近发SCI论文真是越来越难了,没有几张亮眼的图片根本没法在一区发表。今天给大家介绍一个超级实用、操作简便的论文出图神器——活细胞示踪剂(论文里写作celltracker)。 活细胞示踪剂可以用绿色荧光或红色荧光标记细胞,而且荧光能在七天内保持不淬灭。特别适合研究多种细胞共培养过程中,某种细胞的生长、分化和运动状态。比如你在水凝胶中培养细胞,但水凝胶透光率差看不清细胞,这时候就可以用示踪剂来标记观察。相比免疫荧光染色,操作步骤简单,成功率也高。新手也能一次成功! 操作步骤 我们用的是翌圣的CMFDA: 用50ul DMEO溶解50ug CMFDA粉末,配成2mM的母液,然后存到-20度冰箱。 使用时取出母液,放置五分钟化冻后,在离心机里离心3000转五分钟(这一步不能偷懒,不然母液会损失很多)。 用DMEM或其他无血清培养基配置工作液。如果是细胞联系紧密的细胞系,比如HUVEC,工作液的比例是3ul母液+4ml DMEM。如果是细胞贴壁不牢(如231)或者细胞形态很长(如成纤维、成骨细胞),工作液比例是1ul母液+4ml DMEM。 把配好的工作液加入T25细胞培养瓶中,37度孵育10分钟,镜下观察染色情况。孵育完成后用PBS清洗两遍,再37度孵育30分钟。 注意事项 工作液不要用PBS配,细胞会死很多。 细胞最好长满一点再染色,活力会更好。 工作液里母液浓度不要太高,孵育时间最好不要超过20分钟,不然细胞很容易挂掉(别问我为什么知道)。 如果你在透光性不好的凝胶里养细胞,最好用共聚焦拍照。 翌圣家还有一款红色的示踪剂,普通显微镜拍不到,只能用共聚焦拍。 如果你有钱,也可以用赛默飞的产品,据说效果更好。 最后提醒一下,活细胞示踪剂的结果不能代替免疫荧光的结果,如果需要做免疫荧光的朋友们不能偷懒哦! 额外推荐 我最近正在便宜出一些细胞,有HUVEC、231、HFOB1.19、HMCAF(人乳腺癌成纤维细胞),有需要的朋友可以联系我哦! 希望这篇指南能帮到大家,祝大家科研顺利,论文多多!ꀀ
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