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内容来源：安定传媒所属栏目：导读更新日期：2024-12-01

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琼脂糖凝胶电泳实验全攻略 𐟔젥ꌧ𛋊琼脂糖凝胶电泳是一种用于检测DNA含量、分子量和分离不同大小DNA片段的技术。实验中，琼脂糖作为支持介质，利用电泳原理，通过电场作用使带电粒子（如DNA分子）在凝胶中移动，从而实现分离。 𐟧ꠥꌦ�ꤊ凝固琼脂糖：将琼脂糖完全凝固后，小心取出梳子，将凝胶置于电泳槽中。加入电泳缓冲液：向电泳槽中加入电泳缓冲液，液面需高于胶面2~5mm，以确保凝胶两端的电压与外加电压相等。准备样品：在DNA样品中加入含有蔗糖或甘油及指示剂的上样缓冲液，以防止样品在电泳槽中上飘并指示电泳位置。加样：用移液枪将DNA样品加入样品孔中，每孔加样量一般在10~20微升。加样时不必每个样品换枪头，可在阳极槽中反复吸打电泳缓冲液以冲洗枪头。电泳：以加样孔侧为负极，接通电泳槽与电泳仪的电源，电泳时以低温为好，电压5~15v/cm。观察结果：在蓝光灯下观察并记录实验结果。 𐟌미 实验现象电泳时，正负极均有气泡产生，负极产生的气泡明显多于正极。盖子上有一层水雾。在蓝光灯下未观察到本组的DNA样本向前泳动的条带。 𐟔 分析讨论气泡产生原因：水是弱电解质，在直流电作用下，放出氢气与氧气，氢离子与氢氧根离子不断减少，使水不断减少。负极产生的气泡多于正极的原因是：电泳过程中，两分子水分解在正极产生一分子氧气，在负极产生两分子氢气，所以负极产生气体的量是正极的两倍。 DNA显带未观察到的原因：未提取到DNA：在全血基因组DNA的提取实验中，加入SDS溶液后未观察到明显的沉淀，导致后续用100微升TE缓冲液溶解DNA时只能盲目反复冲洗试管壁，可能未能提取到有效的DNA片段。 DNA浓度较低：当DNA量低于电泳可以检测的下限时，将无法在琼脂糖凝胶上显现条带，因为低浓度DNA对应的DNA分子数量太少，进入凝胶后分布稀疏，无法形成可见的条带结构。 DNA分子破碎：提取或处理过程中操作不当，可能产生机械力使基因组DNA断裂，产生很短的DNA片段，无法进入凝胶。取样量不足：少量DNA难以显现明显条带。存在干扰物质：蛋白质、脂质残留可能与DNA混合，影响迁移速率。提取的DNA样品中可能存在部分蛋白质残留，高浓度的白蛋白残留会导致电泳无DNA显带的产生。 𐟓š 参考文献 Smith A, Brown B, Green C. Investigation of non-visible DNA bands in agarose gel electrophoresis caused by low DNA concentration. Journal of Biochemistry, 2020, 167(2):35-39. Wang W, Li K, Zhang Z. The influence of fragmented DNA on the result of agarose gel electrophoresis. Sci Rep, 2021, 11:5623. Li X, Chen Y, Guo J. Protein contamination interfering with DNA band presentation in agarose gel electrophoresis. Electrophoresis, 2019, 40:429-433.

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